福建农林大学考研难吗，农业大学最吃香的专业
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导读
石莼多糖（ULP）是一种具有多种生物活性的绿藻提取物，包括抗凝、抗炎和抗病毒作用。然而，ULP对肝细胞癌发展的抑制能力值得进一步研究。本研究旨在阐明ULP的抗肿瘤作用机制，并评估其对H22肝癌荷瘤小鼠肠道微生物群和代谢的调节作用。我们通过皮下注射H22肝癌细胞建立H22荷瘤小鼠模型，评估盲肠粪便中的肠道微生物群组成，并进行非靶向代谢组学测序；通过蛋白质印迹、RT-qPCR和活性氧（ROS）分析进一步验证了ULP的抗肿瘤活性。ULP通过调节肠道微生物群落（软壁菌、Agathobacter、Ruminiclostridium、副杆菌、乳杆菌和Holdemania）和代谢产物（二十二碳六烯酸、尿酸、N-油酰基多巴胺和L-犬尿氨酸）的组成来减缓肿瘤生长。从机制上讲，ULP通过抑制JNK、c-JUN、PI3K、Akt和Bcl-6的蛋白水平来促进ROS的产生，从而延缓HepG2细胞的生长。因此，ULP通过调节肠道微生物组成和代谢来减弱H22荷瘤小鼠的肿瘤生长。ULP在体外主要通过促进ROS的产生来抑制肿瘤生长。
亮点：
1. 石莼多糖对肝细胞癌的抑制作用；
2. 石莼多糖通过调节肠道微生物组成和代谢来抑制肿瘤生长；
3. 石莼多糖主要通过促进活性氧的产生来抑制肿瘤生长。
论文ID
原名：Suppression of hepatocellular carcinoma by Ulva lactuca ulvan via gut microbiota and metabolite interactions
译名：石莼多糖通过肠道微生物群和代谢物相互作用抑制肝细胞癌
期刊：Journal of Advanced Research
IF：12.822
发表时间：2023.04
通讯作者：赵超
通讯作者单位：福建农林大学
实验设计
实验结果
1. ULP对H22荷瘤小鼠肠道微生物群组成和结构的影响
为了进一步探讨ULP的抗肿瘤作用机制，我们构建了H22肝癌荷瘤小鼠模型并进行了ULP干预。我们发现，随着ULP浓度的增加，抗肿瘤活性增强（图S1a）。在给药过程中，低浓度ULP和模型组的4只小鼠在第21天死亡，而中高浓度ULP组的1只小鼠死亡（图S1b）。此外，我们对来自三种不同小鼠（正常组、模型组和ULP组）的粪便细菌DNA进行了高通量16S rRNA基因测序，结果正确地反映了每个样本中微生物群落的多样性和同质性。为了进行分类学鉴定和多样性调查，15个粪便样本（选择了正常组、模型组和高剂量ULP组各5只小鼠的粪便）共产生75409个高质量读数。分类学鉴定分析确定了2420个OTUs（表S3）。所有样本的物种积累曲线（图S2a）和稀疏曲线（图S2 b）证实了采样工作的充分性。此外，秩-丰度分布曲线（图S2c）显示，与正常组相比，模型组和ULP组的丰度增加，细菌相对失衡。相较于正常组，在OTU水平下模型组和ULP组观察到物种数、Chao1和Shannon指数均略有增加；然而，与模型组相比，ULP组的观察物种和Chao1、Shannon和Simpson指数有所下降，但没有统计学意义（图1a-d）。在β多样性的anosim分析中（图S2e-S2f），所有三组数据都显示出显著差异，表明与组间差异相比，组内差异在统计学上不显著。基于加权和未加权的unifrac距离测量，主坐标分析（PCoA）提供了不同群体肠道微生物种群的总结。模型组和ULP组不是互相分离，而是在整个区域中混合的（图1e-1f）。我们在物种水平上进行进一步分析，以评估饮食变化对各组肠道菌群的影响，我们使用肠道微生物群的分布热图，确定了小鼠肠道群落在门水平上的改变（图1g）。与模型组相比，厚壁菌门和Melainabacteria在ULP处理后的小鼠肠道微生物群中更为普遍。拟杆菌门、厚壁菌门、疣菌门和变形菌门是小鼠肠道菌群中最常见的细菌门（图1h）。
图1小鼠肠道微生物组的结构分析和多样性
通过（a）Chao 1指数、（b）Shannon指数、（c）观测物种和（d）Simpson指数进行的alpha多样性分析。（e）在OTU水平上使用未加权的unifrac距离进行的PCoA。（f）使用加权unifrac距离在OTU水平上进行PCoA。（g）肠道微生物组在门水平上的热图。（h）16S rRNA基因测序分析小鼠粪便细菌分类的门水平模式。（i）每组细菌门的组成比例；n=5，分别用于正常组、模型组和ULP组。（a-d）数据显示为平均值±标准差，*p<0.05，**p<0.01。
2. 粪便微生物群的改变与ULP干预有关
线性判别分析效应大小（LEfSe）用于各组之间的配对比较，以揭示生物标志物。我们在这项研究中分析了高维类别，发现了三组细菌群落优势的变化。一个因素在比较中越重要，基于每组细菌属影响的线性判别分析(LDA)得分越高，预设值为4，得分越低，一个元素的重要性就越低。根据肠道微生物群落的LEfSe分析，这三组之间相对丰度的变化是由19个物种引起的，ULP组、正常组和模型组分别有5个、11个和3个物种（图2a-2b）。
在ULP小鼠的样本中，罗氏菌、拟普雷沃氏菌和Agathobacter含量丰富（图S3b）。p_Tenericutes的丰度（图S3e）在模型组中比正常组高得多，但ULP干预扭转了这一趋势（图3-b-3c）。此外，ULP干预显著改变了g_Agathobacter、g_unidentified_Closetriales、g_Ruminiclostridium、g_Parabacteroides、g_Lactobacillus和g_Holdemania的丰度（图3a、3c-3i）。
图2 LEfSe分析检测到三组之间肠道微生物群的差异
（a）LDA得分分布的条形图显示了正常组、模型组和ULP组中丰度存在统计学显著差异的物种。呈现的是LDA值>4的分类群。（b）分支图显示了在正常、模型和ULP组中分类群的分类组织和相对丰度。
3.基于ULP和模型组粪便代谢组的肠道代谢分析
细菌代谢产物以多种方式影响宿主。我们使用Tax4Fun进行功能预测，获得了几种代谢途径（图4a-4c）。此外，我们推测ULP可以影响代谢产物的变化，同时改变肠道微生物群。因此，我们使用非靶向代谢组学鉴定了模型和ULP组小鼠的粪便代谢物，总共发现1187种代谢产物。PCA和PLS-DA用于评估数据，以验证ULP干预对模型小鼠代谢模式的影响，并确定显著改变的代谢物。ULP处理后，PCA和PLSDA评分图显示了各组代谢物组成的清晰分类（图4d-4e），来自同一组的样本聚集在一起。前两个PCA成分的百分比变化分别为29.89%和23.14%，PLS-DA的百分比变化相应为24.47%和23.52%。
图3 ULP干预后小鼠肠道微生物群的微生物变化
（a）ULP干预下主要细菌属变化的可视化表示。（b）ULP干预下主要细菌门变化的可视化分析。（c-i）用ULP处理后的H22荷瘤小鼠肠道微生物群的变化。数据显示为平均值±标准差，*p<0.05，**p<0.01。
我们通过使用VIP>1.0、倍数变化（FC）>1.2或FC<0.833和p值<0.05的阈值来筛选模型组和ULP组之间的差异表达代谢物（DEM）。与模型组相比，ULP组有12种代谢产物上调，30种代谢产物下调（表S4）。通过将两组小鼠的代谢物与KEGG数据库进行比较，我们创建了代谢物分类图谱（图4f）。热图显示，基于42个DEMs，ULP组具有不同的代谢模式（图4g）。为了描述两组中的代谢物表达模式，我们在VIP分析后绘制了变量投影重要性（VIP）条形图（图4h）。
图4粪便代谢组学，用于测量模型组和ULP组之间的代谢产物水平
（a，b）基于Tax4Fun预测KEGG通路丰度的相对直方图。（c）基于Tax4Fun预测KEGG通路富集的热图。（d）模型组与ULP组的PCA。（e）模型组与ULP组的PLS-DA。（f）基于模型组与ULP组中DEMs的KEGG富集通路。（g）热图显示了ULP组与模型组的比较，产生了12种上调和30种下调的代谢物。（h）DEMs的VIP分数。
4. ULP和模型组特异性粪便代谢组与不同肠道微生物群的相关性
我们使用Spearman系数检验了不同肠道微生物群与前20个DEMs之间的相关性。一些代谢产物的变化与肠道微生物群有关，具有统计学意义。ULP显著增加了D-苯丙氨酸的水平，并与g_unidentified_Clostridiales呈负相关（图5a，5i）。癌症和慢性肝病患者的7-酮胆固醇（7-KC）水平较高。7-KC降低了阿霉素对HCC细胞的杀伤作用。在此，ULP显著降低了胆钙化醇和7-KC的水平，并与p_Tenericutes呈正相关（图5c、5d和5i）。Lee等人发现p_Tenericutes与肿瘤负荷呈正相关。相反，g_Lactobacillus与胆钙化醇和7-KC呈负相关（图S6f–S6h）。ULP显著增加了尿酸（UA）和二十二碳六烯酸（DHA）的水平，这两种代谢产物已知会显著增加ROS水平。天然多糖通过增加ROS水平诱导H22细胞凋亡。这些结果表明，ULP可以调节肠道微生物群的丰度和代谢变化，并提高ROS水平以实现肿瘤抑制。
图5 H22荷瘤小鼠的代谢产物变化和肠道微生物群与ULP干预的相关性
（a-h）不同粪便代谢物的变化。数据显示为平均值±标准差，*p<0.05，**p<0.01。（i）不同肠道微生物群与前20个DEMs之间的Spearman相关性分析。
5. ULP通过增加ROS水平抑制肿瘤进展
一些DEMs与ROS密切相关，而一些可以直接促进ROS的产生。MetaboAnalyst 5.0用于分析42个DEM，它们之间的相关性表明其接近性（图6a；图S7a，S7c）。这些DEMs与其他代谢产物密切相关，包括氧、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）（图6b）。这三种代谢产物与ROS密切相关，NADH和NADP可以维持前者的产生。我们也进行了DEMs和ROS相关基因之间的网络相互作用分析，其中三个基因与ULP干预后全长转录组测序中的基因一致（图6c-6d）。研究表明，由于缺氧，乳腺癌症细胞在敲低脂肪酸结合蛋白7（FABP7）后会产生更多活性氧。网络图显示FABP7与DHA有关（图6c），这进一步证实了代谢组与全长转录组有关。为了进一步证实ULP是否可以调节ROS以发挥抗肿瘤作用，我们在人HCC细胞系HepG2中进行ULP干预，并在24小时后进行CCK-8测定以评估细胞活力。结果表明，随着ULP浓度的增加，HepG2细胞的活力稳步下降（图6e）。MetaboAnalyst 5.0用于对全长转录组中的DEMs和差异表达基因进行联合途径富集分析。多种途径与癌症和活性氧有关，包括参与癌症和细胞周期的途径，以及血管内皮生长因子（VEGF）信号途径（图6f）。我们对HepG2细胞进行ULP干预，并测定超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）活性。ULP显著降低SOD水平并增加MDA水平（图6g，6h）。当ROS浓度高时，肿瘤细胞发生凋亡。增加活性氧的数量是癌症治疗的关键策略。我们研究了ULP对细胞ROS生成的影响，使用DCFHDA荧光测定法评估HepG2细胞中ROS的量。ULP处理后荧光增强，表明ULP可导致HepG2细胞内ROS的浓度依赖性积累（图6k、6L）。这些发现表明，ULP通过促进HepG2细胞中的氧化应激，导致ROS的产生，从而阻碍了HepG2的发育。在DEMs中，N-油酰基多巴胺（OLDA）在癌症或肿瘤相关研究中未见报道。因此，OLDA被用于处理HepG2细胞。OLDA具有良好的抗肿瘤活性，并能显著抑制HepG2细胞的增殖。
图6 ULP通过增加氧化应激抑制肿瘤增殖
（a）显示几种代谢物之间关系的网络图。（b）不同代谢物和其他代谢物之间的关联如网络图所示。（c）显示各种代谢产物和基因之间关系的图表。（d）ULP干预后发现了三个与DEMs相关的基因，与图6c所示的结果一致。（e）CCK-8试验用于评估ULP处理后HepG2细胞的生长。OD450吸光度越低，表明细胞活力越低。（f）差异表达基因和代谢产物的KEGG富集分析。（g，h）ULP干预后HepG2细胞中SOD和MDA的活性。（i，j）CCK-8测试以评估用OLDA处理24或48小时的HepG2细胞的增殖。OD450吸光度越低，表明细胞活力越低。（k，l）ULP处理的HepG2细胞中ROS水平和荧光强度的评估。（e，g-k）数据显示为平均值±标准偏差；与对照组相比，**p＜0.01。
6. ULP通过调节miR-98-5p促进ROS生成
miR-98-5p基因是许多恶性肿瘤的治疗靶点，在宫颈癌症细胞中过度表达并促进细胞凋亡。miR-98-5p也是非小细胞肺癌癌症的靶点。与我们的发现一致，与抑制剂相比，hsa-miR-98-5p抑制剂降低了肿瘤体积和重量。与对照组相比，ULP处理组的miR-98-5p表达显著降低（图7a）。miR-98-5p抑制剂转染的HepG2细胞的荧光强度比inhibitor组大得多，与ULP处理组的高荧光强度一致（图7b）。出乎意料的是，根据TCGA数据库，我们发现与健康肝组织相比，miR-98-5p在肿瘤组织中高表达（图7d）。然而，我们的研究结果表明，ULP显著抑制miR-98-5p的表达，这使其在肿瘤和正常组织中的表达相当，从而产生抗肿瘤作用。此外，来自TCGA数据库的数据表明，与高水平相比，miR-98-5p的表达在低水平下与更好的预后结果相关（图7e）。使用miRNA预测网站Targetscan和miRDB预测miR-98-5p的靶基因，我们从上述结果的交叉点中总共检索到757个靶基因（图7c）。基于GO和KEGG功能富集分析对预测的靶基因进行分析。如图7h所示，对miR-98-5p预测靶基因分子功能的GO富集分析表明，这些基因与蛋白质结合、金属离子结合和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性有关。富集的生物过程与细胞对氨基酸刺激的反应有关。在细胞成分水平上，内质网管腔和膜显示富集。预测的miR-98-5p靶基因的KEGG富集分析在癌症相关通路中高度富集，如PI3K-Akt、MAPK、FoXO和p53信号通路（图7i）。ULP通过调节多种肿瘤相关信号通路发挥抗肿瘤作用，并通过miR-98-5p/ROS信号通路介导肿瘤相关凋亡。
图7 ULP通过抑制miR-98-5p来抑制HepG2细胞增殖，从而增加细胞中的氧化应激
（a）进行RT-qPCR测定以检测miR-98-5p在ULP处理的HepG2细胞中的表达。与对照组相比，数据显示为平均值±标准差，*p<0.05，**p<0.01。（b，g）用miR-98-5p模拟物和抑制剂处理后HepG2细胞中的氧化应激。（c）miR-98-5p的预测靶基因的交叉点。（d）miR-98-5p在TCGA中的表达。（e）基于miR-98-5p表达的TCGA样本中的总生存率。（h，i）对miR-98-5p的预测靶基因进行GO富集分析（h）和KEGG富集分析（i）。（b）数据显示为平均值±标准差，*p<0.05，**p<0.01。
7. ULP调节ROS相关基因和蛋白的表达
miR-98-5p的许多预测靶点具有抗肿瘤特性。我们选择了细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、BTB结构域和CNC同源物1（BACH1）、丝裂原活化蛋白激酶8（JNK）和Fas配体（FASLG）进行进一步分析。已知CDKN1A在NSCLC中上调，当它被敲除时，凋亡细胞的数量显著增加。BACH1在肿瘤组织中广泛表达，可以影响包括氧化应激反应和细胞周期在内的多种生理过程，并在调节癌症细胞的代谢途径中发挥新的作用。miR-98-5p可以通过靶向FASLG降低HCC细胞对顺铂处理的易感性。如图8a所示，我们通过RT-qPCR分析评估mRNA表达。与对照组相比，ULP处理组的CDKN1A、BACH1和FASLG mRNA表达水平显著上调。与对照组相比，ULP组的JNK表达下调。CDKN1A和BACH1在HCC中的表达较低。ULP可上调HepG2细胞中CDKN1A和BACH1的表达（图8b、8g）。与用NC转染的细胞相比，我们在用miR-98-5p模拟物转染的HepG2细胞中观察到CDKN1A和BACH1的低表达，而在用miR-98-5p抑制剂转染的细胞中可以看到CDKN1A和BACH1的高表达，这与miRNA负调控的结果一致（图8c、8f）。CDKN1A的表达与更高的总生存率和无病生存期相关，这与ULP处理组CDKN1A表达的升高一致。与对照组相比，Jun原癌基因（cJUN）、JNK、蛋白激酶B（Akt）、B细胞淋巴瘤6（Bcl-6）、细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）的蛋白水平显著降低，而有丝分裂原活化蛋白激酶14（P38）的蛋白含量显著升高。根据RT-qPCR验证，JNK在ULP处理组中下调。众所周知，JNK能正向调节自噬以抵消细胞凋亡。在我们的研究中，下调的JNK水平促进了肿瘤细胞的凋亡。Bcl-6敲低导致心肌细胞氧化应激、细胞凋亡、促炎细胞因子表达和P38活化增加。与对照组相比，ULP处理组Bcl-6表达下调，而P38表达升高，这表明ULP可能通过抑制Bcl-6和激活P38来加重对肿瘤细胞的损伤，从而促进HepG2细胞的氧化应激。β-Thujaplicin通过激活线粒体自噬、有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路，导致HepG2细胞周期停滞和死亡。ULP处理组中P38的表达水平较高。PI3K/Akt/mTOR信号通路是由ROS水平介导的。木兰花碱通过活性氧调控Akt抑制人胃癌。与对照组相比，ULP组的PI3K和Akt蛋白水平较低，这与ROS水平的增加一致。Lsolongifolonone发挥抗肿瘤作用，通过下调CDK2触发MCF-7细胞的细胞周期停滞，这与我们的研究结果一致。总之，ULP通过改变ROS相关蛋白水平和miR-98-5p的靶基因来发挥抗肿瘤活性。
图8与ROS水平相关的mRNA和蛋白表达受ULP调节，减缓了HepG2肿瘤细胞的发育
（a）为了检测CDKN1A、BACH1、JNK和FASLG的表达，进行RT-qPCR分析。与对照组相比，数据显示为平均值±标准差，*p<0.05，**p<0.01。（b，g）来自TCGA的样品中CDKN1A和BACH1的表达。（c，f）RT-qPCR测定用于检测用NC、miR-98-5p模拟物、阳性抑制剂或miR-98-5p抑制剂转染的HepG2细胞中miR-98-5p、CDKN1A和BACH1的预测靶基因表达。数据显示为平均值±标准差，*p<0.05，**p<0.01。（d，e）基于miR-98-5p表达的TCGA样本的预后结果。（h，i）通过蛋白质印迹研究ULP对HepG2细胞中与ROS相关的蛋白质影响。条形图显示了CDK2/a-微管蛋白、P38/a-微管蛋白、c-JUN/a-微管蛋白和Akt/GAPDH、JNK/GAPDH、Bcl-6/GAPDH、PI3K/GAPDH比率的定量。与对照组相比，数据显示为平均值±标准差，*p<0.05，**p<0.01。
在全球范围内，第五大常见癌症是原发性肝癌HCC。尽管研究者进行了几十年的研究并创造了新的治疗方案，但HCC患者的总体预后仍然令人沮丧。由于HCC的严重性和低生存率，这仍然是一个亟待满足的需求。天然产品和膳食补充剂越来越受欢迎，或许在未来可用于癌症治疗。由于具有抗肿瘤的功能和无毒特性，生物活性大分子如多糖是治疗癌症的可行选择，它们广泛存在于植物、微生物、藻类和动物中。海藻以其丰富的多糖、矿物质、维生素和其他生物活性成分而闻名，数千年来，海藻在亚洲一直被用作食品和药物。众所周知，这些分子是癌症的潜在治疗靶点。我们之前的研究表明，用石莼多糖处理可以通过调节免疫功能来抑制肿瘤生长。为了进一步探索ULP的抗肿瘤机制，我们对H22荷瘤小鼠的粪便样本进行了非靶向代谢组分析和微生物组测序，从而深入了解了细菌种群之间的关系。这些结果可能揭示新的代谢靶点。
微生物组调节宿主转录组和代谢组，对宿主生理学有着深远的影响。人体内复杂的多糖代谢被认为是由肠道微生物群调节的。糖酵解受到限制，因为人类基因组中靶向各种糖苷连接的有效活性酶不够充分。微生物的基因集比人类的基因补体大近150倍，它们可以激活数百种互补酶，有效地分解各种难以消化的多糖。微生物组及其代谢组与HCC密切相关。因此，该领域的一个潜在方向是利用肠道微生物群及其代谢产物作为筛选工具，以确定新的治疗靶点，用于早期检测癌症。与使用血液和尿液等生物流体的组学技术不同，粪便代谢组显示出遗传、环境和营养因素之间的直接相互作用。因此，涉及粪便样本的代谢组学研究可以更有效地识别生物标志物。我们的研究结果表明，与对照组相比，模型组中软壁菌的丰度要高得多。软壁菌与肿瘤负荷呈正相关，然而ULP可以逆转这一趋势。Ren等人发现，在HCC的早期阶段，副杆菌含量丰富，与模型组相比，ULP给药显著降低了副杆菌的丰度。ULP改变的肠道微生物群与不同的代谢产物有关，具有统计学意义。研究表明，一些差异代谢物抑制癌症的进展，包括DHA、麦角固醇和胆钙化醇。低密度脂蛋白-二十二碳六烯酸（LDL-DHA）是由天然ω-3脂肪酸和DHA重组而成的，可以特异性地破坏癌症细胞。静脉注射LDL-DHA可以显著限制癌症异种移植的发展，纵使长期也是有效的。这与我们的研究结果一致，研究结果表明，与模型组相比，ULP显著提高了DHA水平。此外，DHA通过增加ROS水平降低了乳腺癌症细胞的生长。同样，ULP显著增加了乳杆菌的丰度。通过增加活性氧的数量，乳杆菌可阻止HeLa细胞生长，可用于治疗子宫颈癌症。总之，ULP可能通过调节肠道微生物群和代谢产物来促进ROS的产生，从而抑制肿瘤生长。
肿瘤的两个典型特征是氧化还原平衡改变和氧化还原信号失调，对癌症的发展和治疗抵抗具有重要影响。多糖可以促进活性氧的生成，从而抑制癌症细胞的发育，因为这些活性氧与癌症细胞转化、肿瘤生存、增殖、侵袭和转移有关。ROS相关过程包括MAPK信号传导和转录因子相关途径，如核因子κB和缺氧诱导因子。为了证明ULP通过调节肠道微生物群和代谢产物来促进ROS的产生，我们在HepG2细胞中进行了ULP干预。ULP显著提高了ROS的水平，并显著降低了miR-98-5p的表达。miR-98-5p的过度表达减少了ROS的产生。然而，在抑制miR-98-5p后，ROS的产生显著增加。我们进一步预测了miR-98-5p的靶基因，并进行了功能富集分析。结果表明，PI3K-Akt、MAPK和P53信号通路富集，这些通路与ROS密切相关。同样，癌症、膀胱癌和胰腺癌中也包含癌相关通路的富集（图6f）。因此，ULP通过抑制miR-98-5p来增加ROS水平，从而抑制HepG2细胞的增殖。ULP还显著增加了CDKN1A、BACH1和FASLG的表达，这些基因已被证实为miR-98-5p的靶基因。其中，CDKN1A和BACH1的结果与HepG2细胞中miRNA的负调控一致。CDKN1A和BACH1促进细胞内ROS的积累。ULP通过抑制miR-98-5p的表达和增加BACH1的表达来促进ROS的积累。与正常肝组织相比，癌症组织中CDKN1A和BACH1的表达显著降低。我们还发现，CDKN1A的高表达与更好的预后有关（图8d，8e）。我们通过蛋白质印迹进一步验证了ROS是否可以调节ROS相关蛋白。ULP降低Akt、PI3K、CDK2、c-JUN、Bcl-6和JNK的蛋白水平，同时增加P38的蛋白水平。JNK是一个重要的致癌靶点，它激活自噬并抑制细胞凋亡。JNK通过减少ROS的产生和提高细胞存活率来保护淋巴瘤细胞免于凋亡。ULP部分增加ROS的产生，同时在蛋白质水平上抑制JNK。Bcl-6敲低增加了ROS水平和MDA的产生，并激活了P38的表达，同时降低了SOD的活性。这与我们的研究结果一致，即ULP通过抑制Bcl-6的活性来促进ROS的产生，从而发挥抗肿瘤作用。ROS是PI3K/Akt途径的上游调节因子。这些结果表明，ULP通过降低PI3K和Akt的蛋白水平来促进ROS的产生，最终限制HepG2细胞的增殖。总之，ULP通过调节miR-98-5p/ROS信号通路发挥抗肿瘤作用。
结论
研究结果表明，ULP可以有效抑制H22荷瘤小鼠的肿瘤生长，调节肠道微生物群和代谢。16S rRNA基因测序和非靶向代谢组学分析表明，ULP通过调节肠道微生物群落和代谢来抑制肿瘤生长。ULP可以通过促进ROS的产生来抑制肿瘤。为了证实这一假设，我们在HepG2细胞中进行了ULP干预，发现其可显著增强细胞ROS水平的积累。ULP还通过抑制JNK、c-JUN、PI3K、Akt和Bcl-6的蛋白水平来促进ROS的产生，从而减弱HepG2细胞的增殖。抑制miR-98-5p可促进CDKN1A和BACH1的表达，并增加ROS的产生。从机制上讲，这是通过调节miR-98-5p/ROS信号通路来实现的。总之，ULP主要通过增加ROS的产生来抑制体外和体内肿瘤的发展。
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2090123223001145
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